分子克隆实验指南（原书第四版）（下）

✍ Scribed by M.R.格林; J.萨姆布鲁克 编

• Publisher: 科学出版社
• Year: 2017
• Tongue: Chinese
• Leaves: 512
• Category: Library

✦ Synopsis

分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安...

分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。

Originally published in English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Green and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print in China.Authorized Simplified Chinese translation of the English edition ? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translation is published and sold by permission of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.

✦ Table of Contents

目录-上册
目录-中册
目录-下册
第17章 利用报道基因系统分析基因表达调控
导言
报道基因系统简介
报道基因在调控元件分析中的应用
哺乳动物细胞提取物中􀁬-半乳糖苦酶的测定
哺乳动物细胞提取物中萤光素酶的测定
四环素应答表达系统
方案l 哺乳动物细胞提取物中β-半乳糖符苷的测定
方案2 单萤光素酶报道基因实验
方案3 双萤光素酶报道基因实验
方案4 酶联免疫吸附试验定量检测绿色荧光蛋白
方案5 用四环素调控基因表达建立细胞系
信息栏
荧光蛋白
表位标记
β-半乳糖苷酶
萤光素酶
四环素
第18章 RNA 干扰与小RNA 分析
导言
应用RNA 干扰进行反向遗传学研究
小RNA 分析
方案l 双链siRNA 制备
方案2 通过转染双链siRNA 在哺乳动物细胞中进行RNA 于扰
方案3 通过转染双链siRNA 在果蝇S2 细胞中进行RNA 于扰
方案4 体外转录法制备dsRNA
方案5 采用dsRNA 浸泡果蝇S2 细胞进行RNA 于扰
方案6 采用dsRNA 转染在果蝇S2 细胞中进行RNA 干扰
方案7 小RNA 的Northern 杂交分析
方案8 反转录定量PCR 分析小RNA
方案9 构建小RNA 高通量测序文库
方案1 0 抑制rniRNA 功能的反义寡核昔酸制备
方案1 1 在哺乳动物细胞中通过反义寡核甘酸抑制miRNA 功能
方案1 2 在果蝇S2 细胞中通过反义寡核甘酸抑制miRNA 功能
信息栏
全基因组RNA 干扰： 后基因组学时代的功能基因组学
第19章 克隆基因的表达以及目的蛋白的纯化和分析
导言
表达系统选择
选择合适的表达载体
融合蛋白
外源蛋白的优化表达
方案l 在大肠杆菌中利用可用IPTG 诱导的启动子表达克隆化基因
方案2 用杆状病毒表达系统表达克隆基因
方案3 用甲醇诱导启动子A OXJ 在毕赤酵母中表达克隆基因
方案4 用于纯化大肠杆菌中表达可溶性蛋白的细胞提取物的制备
方案5 采用固化的金属亲和层析纯化多聚组氨酸标记的蛋白质
方案6 采用谷胱甘肤树脂以亲和层析纯化融合蛋白
方案7 包含体中表达蛋白的增溶
方案8 蛋白质的SDS-PAGE
方案9 蛋白质的免疫印迹分析
方案1 0 测定蛋白质浓度的方法
信息栏
膜蛋白纯化的策略
历史注脚： 考马斯亮蓝
第20章 利用交联技术分析染色质结构与功能
导言
利用甲醛交联考查基因组相互作用
Ch lP 分析蛋白质-DNA 相互作用
基于3C 分析染色质相互作用
致谢
方案1 甲醛交联
方案2 制备用于染色质免疫沉淀的交联染色质
方案3 染色质免疫沉淀( ChIP )
方案4 染色质免疫沉淀－定量聚合酶链反应( ChIP-qPCR )
方案5 染色质免疫沉淀－ 芯片杂交( ChIP-chip )
方案6 染色质免疫沉淀－高通量测序(ChIP-seq)
方案7 交联细胞3 C 文库的制备
方案8 环形染色质免疫沉淀(ChIP-loop )文库的制备
方案9 连接产物对照组文库的制备
方案10 PCR 检测3C、ChIP-loop 和对照文库中的3C 连接产物： 文库滴定与相互作用频率分析
方案11 3C 、ChIP-loop 和对照组文库的4C 分析
方案12 3 C 、ChIP-loop 和对照组文库的S C 分析
信息栏
甲酘
基于3C 的实验捕获的是什么？
第21章 紫外交联免疫沉淀(CLI P)技术进行体内RNA 结合位点作图
导言
交联免疫沉淀方法
高通量测序( H ITS ) C L I P
CL I P 结果验证
C L I P 方法演化
CLI P 实验设计原则
致谢
方案1 CLIP 实验免疫沉淀严谨性的优化
方案2 活细胞的紫外交联和裂解物制备
方案3 RNA 酶滴定、免疫沉淀及SDS-PAGE
方案4 3 '-接头的连接和用SDS-PAGE 进行大小选择
方案5 RNA 标签的分离、5 '-接头的连接和反转录PCR 扩增
方案6 RNA CLIP 标签测序
方案7 RNA 接头胶回收及保存
信息栏
紫外蛋白交联的机制和特异性
H I TS-C L IP 数据分析
第22章 Gateway 相容酵母单杂交和双杂交系统
导言
酵母双杂交( Y2 H ) 系统： 概念和方法
酵母单杂交( Y 1 H) 系统： 概念和方法学
Y2 H 和Y1 H 系统： 优点和缺点
假阳性
酵母单杂交和酵母双杂交的操作步骤
致谢
方案l 构建酵母单杂交DNA-诱饵菌株
方案2 生成酵母双杂交DB-诱饵菌株
方案3 从活化域捕获文库中鉴定相互作用分子
方案4 高效的酵母转化
方案5 用于􀁤-半乳糖廿酶活力的菌落转移比色测定
方案6 酵母克隆的PCR
信息栏
为什么整合D NA-诱饵？
选择载体和酵母菌
使用绒布影印平板和影印平板
附录1 试剂和缓冲液
配方
缓冲液
酸和碱
有机试剂
抗生素
封闭剂
细菌保存培养基
元素周期表
附录2 常用技术
玻璃制品和塑料制品准备
透析袋的处理
细胞数目估算
核酸中放射性的测定
污染有淏化乙锭溶液的处理
附录3 检测系统
核酸染色
化学发光
信息栏
辣根过氧化物酶
地高辛
BCIP
AMPPD
免疫球蛋白结合蛋白： 蛋白A, G 和L
附录4 一般安全原则和危险材料
索引