分子克隆实验指南（原书第四版）（上）

✍ Scribed by M.R.格林; J.萨姆布鲁克 编

• Publisher: 科学出版社
• Year: 2017
• Tongue: Chinese
• Leaves: 528
• Category: Library

✦ Synopsis

分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安...

分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。

Originally published in English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Green and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print in China.Authorized Simplified Chinese translation of the English edition ? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translation is published and sold by permission of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.

✦ Table of Contents

译者序
第四版前言
致谢
目录-上册
目录-中册
目录-下册
第一章 DNA的分离及定量
DNA分离
纯化DNA 的商业试剂盒
DNA 定量
方案1 SDS 碱裂解法制备质粒DNA : 少量制备
方案2 SDS 碱裂解法制备质粒DNA: 大量制备
方案3 从革兰氏阴性菌（ 如E. coli ) 中分离DNA
方案4 乙醇法沉淀DNA
方案5 异丙醇法沉淀DNA
方案6 用微量浓缩机进行核酸的浓缩和脱盐
方案7 丁醇抽提法浓缩核酸
方案8 聚乙二醇沉淀法制备M 1 3 噬菌体单链DNA
方案9 M 1 3 噬菌体铺平板
方案1 0 M l 3 噬菌体液体培养
方案1 1 M 1 3 噬菌体双链（ 复制型） DNA 的制备
方案1 2 利用有机溶剂分离纯化高分子质量DNA
方案1 3 用蛋白酷K 和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
方案1 4 一步法同时提取细胞或组织中的DNA 、RNA 和蛋白质
方案1 5 从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNA
方案1 6 快速分离酵母DNA
方案1 7 微型凝胶电泳后使用澳化乙锭( EB ) 估算条带中DNA 数量
方案1 8 利用Hoechst 3 325 8 通过荧光分析仪估算DNA 浓度
方案1 9 用PicoGreen 定量溶液中的DNA
第2章 DNA 分析
琼脂糖凝胶电泳
凝胶中DNA 的回收
方案l 琼脂糖凝胶电泳
方案2 琼脂糖凝胶中DNA 的染色检测
方案3 聚丙烯酰胺凝胶电泳
方案4 聚丙烯酰胺凝胶中DNA 的染色检测
方案5 聚丙烯酰胺凝胶中DNA 的放射自显影检测
方案6 碱性琼脂糖凝胶电泳
方案7 成像： 放射自显影和感光成像
方案8 用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA
方案9 低熔点琼脂糖凝胶中DNA 的回收：有机溶剂抽提法
方案1 0 聚丙烯酰胺凝胶中DNA 片段的回收：压碎与浸泡法
方案1 1 Southern 印迹
方案1 2 Southern 印迹： DNA 从一块琼脂糖凝胶同时向两张膜转移
方案1 3 采用放射性标记探针对固定在膜上的核酸DNA 进行Southern 杂交
信息栏
第3章 质粒载体克隆与转化
转化
方案l 制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法： 高效转化策略
方案2 制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法：“超级感受态＂ 细胞
方案3 大肠杆菌的简单转化： 纳米颗粒介导的转化
方案4 电穿孔法转化大肠杆菌
方案5 质粒载体克隆： 定向克隆
方案6 质粒载体克隆： 平末端克隆
方案7 质粒DNA 的去磷酸化
方案8 向平末端DNA 添加磷酸化衔接子I接头
方案9 克隆PCR 产物： 向扩增DNA 的末端添加限制性酶切位点
方案1 0 克隆PCR 产物： 平末端克隆
方案1 1 克隆PCR 产物： 制备T 载体
方案1 2 克隆PCR 产物： TA 克隆
方案1 3 克隆PCR 产物： TOPO TA 克隆
方案1 4 使用X-Gal 和IPTG 筛选细菌菌落： a-互补
信息栏
关照大肠杆菌
用DNA 转化细菌的历史
聚合酶链反应产物克隆指南
BioBricks 和DNA 片段的有序组装
TO PO工具： 创建带有功能元件的线性表达结构
抗生素
衔接子
接头
连接和连接酶
缩合剂和聚合剂
限制性内切核酸酶的发现
限制性内切核酸酶
氯霉素
ccdB 基因
λ噬菌体
M 1 3 噬菌体
质粒
黏粒
第4章 Gateway 重组克隆
Gateway 克隆的基本原理和应用
Gateway 克隆的缺点和替代克隆系统
方案l 扩增Gateway 载体
方案2 制备可读框入门克隆和目的克隆
方案3 应用多位点LR 克隆反应制备目的克隆
信息栏
第5章 细菌人工染色体及其他高容量载体的应用
高容量载体的发展： 优势和不足
细菌人工染色体的应用
致谢
方案1 BAC DNA 的小量分离和PCR 检验
方案2 BAC DNA 的大量制备和线性化
方案3 通过脉冲电场凝胶电泳检验BAC DNA 的质量和数量
方案4 两步BAC 工程： 穿梭载体DNA 的制备
方案5 A 同源臂( A-Box ) 和B 同源臂( B-Box ) 的制备
方案6 克隆A 和B 同源臂到穿梭载体
方案7 重组穿梭载体的制备和检验
方案8 通过电穿孔法转化重组穿梭载体到感受态BAC 宿主细胞
方案9 共合体的检验和重组BAC 克隆的筛选
方案1 0 一步BAC 修饰： 质粒制备
方案1 1 A 同源臂( A-Box ) 的制备
方案1 2 克隆A 同源臂到报道穿梭载体
方案1 3 用RecA 载体转化BAC 宿主
方案1 4 转移报道载体到BAC/RecA 细胞以及共合体的筛选
方案1 5 酿酒酵母( S. cerevisiae ) 的生长和DNA 制备
方案1 6 酵母DNA 的小量制备
信息栏
CRE-/oxP
用EGFP 作为报道分子
同源臂、共合体和重组体的引物设计
酵母培养基
第6章 真核细胞RNA 的提取、纯化和分析
用单相裂解试剂提取总RNA
方案l 从哺乳动物的细胞和组织中提取总RNA
方案2 从斑马鱼胚胎和成体中提取总RNA
方案3 从黑腹果蝇提取总RNA
方案4 从秀丽隐杆线虫中提取总RNA
方案5 从酿酒酵母菌中采用热酸酚提取总RNA
方案6 RNA 定量和储存
方案7 RNA 的乙醇沉淀
方案8 通过无RNase 的DNase I 处理去除RNA样品中的DNA 污染
方案9 Oligo ( dT ) 磁珠法提取poly ( A ) + mRNA
方案1 0 按照大小分离RNA: 含甲醒的琼脂糖凝胶电泳
方案1 1 根据分子质量大小分离RNA : RNA 的尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
方案1 2 琼脂糖凝胶中变性RNA 的转膜和回定
方案1 3 聚丙烯酰胺凝胶的电转移和膜固定
方案1 4 Northern 杂交
方案1 5 纯化RNA 的点杂交和狭缝杂交
方案1 6 用核酸酶S l 对RNA 作图
方案17 核糖核酸酶保护分析： 用核糖核酸酢和放射性标记的RNA 探针对RNA 作图
方案1 8 引物延伸法分析RNA
信息栏
如何去除RNase
RNase 抑制剂
焦碳酸二乙酷( D E P C )
核酸酶S 1
第7章 聚合酶链式反应
基础PCR 反应
基础PCR 反应中引物的设计
m RNA 的检测、分析及定量
PCR 中的污染
方案l 基础PCR
方案2 热启动PCR
方案3 降落PCR
方案4 高GC 含量模板的PCR 扩增
方案5 长片段高保真PCR ( LA PCR )
方案6 反向PCR
方案7 巢式PCR
方案8 m阳\JA 反转录产物cDNA 的扩增： 两步法RT-PCR
方案9 由m贮寸A 的5 '端进行序列的快速扩增：5 '-RACE
方案1 0 由m贮寸A的3 ' 端进行序列的快速扩增：3 ' -RAC E
方案1 1 使用PCR 筛选克隆
信息栏
Taq DNA 聚合酶
PCR 理论
核糖核酸酶H
大肠杆菌的dut 和ung 基因
末端转移酶
第8章 生物信息学
导言
方案l 使用UCSC基因组浏览器将基因组注释可视化
方案2 使用BLAST 和ClustalW 进行序列比对和同源性检索
方案3 使用Primer3Plus 设计PCR 引物
方案4 使用微阵列和RNA-seq 进行表达序列谱分析
方案5 将上亿短读段定位至参考基因组上
方案6 识别ChIP-seq 数据集中富集的区域（寻峰）
方案7 发现顺式调控基序
信息栏
数据格式
算法、门户网站和方法