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Steroidumwandelnde Enzyme aus Mikroorganismen. V. Reinigung einer 4-En-3-oxosteroid: (Akzeptor)-1-en-oxidoreductase aus Nocardia opaca und Charakterisierung der prosthetischen Gruppe

✍ Scribed by N. N. Lestrovaja; S. Dänhardt; Dr. C. Hörhold

Publisher
John Wiley and Sons
Year
2007
Tongue
English
Weight
572 KB
Volume
18
Category
Article
ISSN
0233-111X

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✦ Synopsis

Steroidumwandelnde Enzyme aus Mikroorganismen V. Reinigung einer 4-En-3-oxosteroid : (Akzeptor)-I -en-oxidoreductase aus Nocardia opaca und Charakterisierung der prosthetischen Gruppe N. N. LESTROVAJA, S. DANHARDT und C. HORHOLD (Eingegangen am 24.12.1976) Fur die Reinigung der 4-En-3-oxosteroid :(Akzeptor)-1-en-oxidoreductase aus Nocardia opaca wurden folgende Methoden angewandt : Abtrennung der Nucleinsiiuren rnit Streptomycinsulfat, fraktionierte Proteinfiillung mit Ammoniumsulfat, Gelfiltration an Sephadex G-100, Chromatographic und Rechromatographie an DEAE-Cellulose. Dabei konnte das Enzym 16Ofach mit einer Ausbeute von 40% angereichert werden. Die Steroid-1-Dehydrogenasekativitat wurde durch NAD, NADP und FMN nicht beeinflu&, FAD zeigte dagegen einen positivcn Effekt. Bei Behandlung mit Ammoniumsulfat unter muren Bedingungen zur Dissoziation in Proteinanteil und prosthetische Gruppe konnte eine Apoenzympraparation hergestellt werden, die nur noch geringe Aktivitat aufwies. Durch Zugabe von FAD in niedriger Konzentration erfolgte eine

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The 4-en-3-oxosteroid-5a-reductase from Mycobacterium smegmatis mas bound biospecifically on the affinant containing an immobilized testosterone ligand. The enzyme obtained by elution with ethylene glycol and urea in a 32 fold purity has a S. A. of 8.73 x p ~i androstenedione min-1 mg-'. The coenzy