Benzyl-ITC (benzyl isothiocyanate) reacts preferentially with amino groups and sulfhydryl side chains of bovine sarcoplasmic proteins to form thiourea and dithiocarbamate derivatives, generally resulting in a decrease in solubility of the derivatives along a wide pH range. Under these conditions, it was also possible to show that secondary amine side chains, as found in tryptophan. .dso react with benzyl-ITC. A quenching of tryptophan fluorescence intensity after interaction with benzyl-ITC was also observed. Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) experiments in the presence of urea indicated changes in electrophoretical mobility and in composition of subfractions. Changes in surface hydrophobicity and composition as determined by the ANS (8-anilinonaphthalene-I-sulfonate) methode and RP-HPLC were also observed. Polymerisation of protein molecules after reaction with benzyl-ITC was documented using the SDS-PAGE technique. These investigations showed that a group of subfractions belonging mainly to glycolytic enzymes and absociated proteins with molecular weight between 38 -70 kDa was highly reactive.
Zusammenfassung
Reaktionen von Benzylisothiocyanat rnit Rinder-Sarkoplasma-Proteinen Benzyl-ITC (Benzylisothiocyanat) reagiert bevorzugt mit Amino-und Sulfhydryl-Seitengruppen der Rinder-Sarkoplasma-Proteine unter Bildung von Thioharnstoffderivaten und Dithiocarbamidsaureestern, verbunden rnit einer Abnahme der Proteinloslichkeit iiber einen weiten pH-Bereich. Gleichzeitig kommt es auch zu einer Reaktion am Ringstickstoff des Tryptophans, was sich in einer Veranderung der Fluoreszenzintensitat dieser Aminosaure nach Umsatz rnit dem ITC zeigt. Die elektrophilen Reaktionen der Benzyl-ITC rnit den genannten Proteingruppen fiihren zu einer Veranderung der elektrophoretischen Mobilitat der Proteine (Polyacrylamid-Gelelektrophorese [PAGE]; Gegenwart von Harnstoff), verbunden rnit einer Veranderung der Protein-Subfraktionen. Gleichzeitig ist eine Polymerisation von Proteinen nachweisbar (SDS-PAGE-Technik). Bevorzugte Reaktionspartner sind glycolytische Enzyme. Diese Reaktionen fiihren ebenfalls zu einer mittels Reversed-Phase-HPLC nachweisbaren Veranderung der Hydrophobizitat. Gleichzeitig nimmt die mittels der ANS (8-Anilinonaphthalin-1 -sulfonat)-Methode bestimmte Oberflachen-Hydrophobizitat zu.