Messung der Kulturfluoreszenz zur Überwachung und Charakterisierung von Insektenzellkultivierungen in Bioreaktoren
✍ Scribed by Dipl.-Chem. Klaus-Dieter Anders; Dipl.-Chem. Rafat Akhnoukh; PD Dr. Thomas Scheper; Dr. Gerlinde Kretzmer
- Publisher
- John Wiley and Sons
- Year
- 1992
- Tongue
- German
- Weight
- 171 KB
- Volume
- 64
- Category
- Article
- ISSN
- 0009-286X
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✦ Synopsis
Die Kultivierung der Zellinie Spodoptera frugiperda SF9 dient in erster Linie dazu, eine geniigend hohe Anzahl von Wirtszellen zur Produktion von Baculoviren zur Verfiigung zu stellen. Sie konnen verschiedene wirtschaftliche Bedeutungen haben. Ein Prototyp der Familie der Baculoviren ist der Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV). Bei der AcMNPV-Infektion werden zwei Virentypen gebildet: der extracellular virus (ECV) und der occluded virus (OV). Letzterer ist in einer ,,Polyhedra" genannten Proteinhiille eingeschlossen, die hauptsachlich aus Polyhedrin-Protein besteht [l]. Die Entwicklung eines optimierten Kultivierungsverfahrens setzt neben geeigneten Kultivierungsbedingungen [2, 31 eine umfangreiche ProzeBanalytik voraus. Die On-line und In-situ-Messung der NAD(P)H-abhangigen Kulturfluoreszenz und dcr optischen Dichte (OD) bieten hierbei eine gute Moglichkeit zur Biomasse-Bestimmung und -Charakterisierung. Neben der Standardanalytik und -regelung (PO*, pH, Drehzahl, Temperatur) wird die Kulturfluoreszenz rnit Hilfe eines Ingold-Fluorosensors (Ingold AG, Urdorf/Schweiz) in situ gemessen. Mit den Kulturfluoreszenz-Messungen sollen die Wachstumsphasen von Spodoptera frugiperda in serumhaltigen Medien, wie Grace und TC-100, sowie in serumfreiem Ex-Cell 401 Me,dium beobachtet und Aussagen iiber den Infektionsverlauf rnit Baculoviren gemacht werden. Die OD-Bestimmung erfolgt photometrisch bei 570 nm iiber eine externe Schlaufe mit vorgeschaltetem Blasenabscheider. Die Messungen dienen in erster Linie zur Bestimmung der Zelldichte bis zum Ende der exponentiellen Wachstumsphase nach einer Eichmessung. Abb. 1 zeigt einen typischen zeitlichen Verlauf von Fluoreszenz und optischer Dichte (OD) wahrend einer Fermentation von Spodoptera frugiperda in Grace-Medium. Die Anfangszelldichte betragt 3,3 . lo4 rn1-I. Die Fluoreszenzwerte
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