Synthese von {2-[3-(2-Ammonioethoxy)benzoyl]ethyl}-trimethylammonium-Bromid-hydrobromid für die Affinitätschromatographie von Cholin-Acetyltransferase (ChAT; EC 2.3.1.6)
✍ Scribed by Gaetano Riggio; Alexander Josef Raeber; Wolfgang Herbert Hopff
- Publisher
- John Wiley and Sons
- Year
- 1989
- Tongue
- German
- Weight
- 627 KB
- Volume
- 72
- Category
- Article
- ISSN
- 0018-019X
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✦ Synopsis
Das Enzym Cholin-Acetyltransferase (ChAT; EC 2.3.1.6) katalysiert die Synthese des Neurotransmitters Acetylcholin aus Acetyl-Coenzym A und Cholin. Die ChAT stellt ein klassisches Enzym dar, das aus Apoenzym und Coenzym besteht. Das Apoenzym besteht aus dem Protein-Trager. Bei dem Coenzym handelt es sich um den Acetyl-Donor Acetyl-Coenzym A. Da bis heute verhaltnismassig wenig uber die Struktur des Enzyms aus Wirbeltieren bekannt ist, entschlossen wir uns, das Enzym aus elektrischen Organen des Zitterrochens Torpedo marmorata zu isolieren. Elektrische Organe stellen ein ideales Ausgangsmaterial fur die ChAT-Isolierung dar, da sie unter verschiedenen Nervengeweben aus Wirbeltieren die hochsten ChAT-Konzentrationen aufweisen [I]. Herkommliche Methoden der Protein-Reinigung fuhrten nur zu teilweise gereinigten ChAT-Preparationen [2] [3]; deshalb wurde das Enzym durch Affinitatschromatographie mit einem spezifischen ChAT-Inhibitor als Affinitatsligand isoliert. Die bekannten Inhibitoren der ChAT lassen sich in drei Gruppen einteilen. (2-Benzoylethyl)trimethylammonium-chlorid (BETA; l), ein Keto-Analog von Acetylcholin wurde von Rowell et al. [4] auf seine inhibitorischen Eigenschaften auf die ChAT untersucht. BETA ist ein stabiler Inhibitor der ChAT [4], mit einer IC,, von (9,9 f 1,3) x 1 0 -6 ~ [5]. Strukturell lasst sich BETA zwischen den Grundstrukturen der zwei schon bekannten Gruppen von ChAT-Inhibitoren einordnen, den Styrylpyridinen einerseits und den halogenierten Derivaten des Acetylcholins andererseits. Schema 2 ,CH3 CO-CH,-CH,-N, . HCI L ~~~> -c H z c H 2 0 CH, , ,CH3 CH3 9 + CH,=N, CI-A 11