der Morgenstelle 8, 7400Tübingen Eingegangen am 14. Januar 1985 17P-Estradiol-7a-butansäure (1) wird unter Zusatz von Dicyclohexylcarbodiimid mit Fluoresceinamin zu Estradiol-7a-butansäure-fluoresceinamid (3) gekoppelt. 17P-Estradiol-7a-butyiamin (2) reagiert mit Fluorescamin zum entsprechenden Pyrrolinon-Derivat 4 und rnit Fluoresceinisothiocyanat zu Estradiol-7a-butyl-fluoresceinylthiocarbamid (5). Fluoreszenzmessungen ergeben, daB die Konjugate in Konzentrationen von weniger als 1 nmol/ml noch gut nachweisbar sind. In Kompetitionsversuchen erfolgt eine 50proz. Verdrängung von [3H]-Estradioí vom cytosolischen Estrogenrezeptor in Konzentrationen von 5 X 10-7mol/l durch 3, 1 X 10-6mol/l durch 4 und 1,8 x 10-7 mol/l durch 5.
Syntheses and Properties of Fluorescent Estradiol Derivatives
prepared by linking fluoresceinamine to 4-(3~,17fi-dihydroxyestran-7a-yl)butanoic acid (1) with the aid of dicyclohexylcarbodiimide. 7a-(4-aminobutyi)-3~,17~-estradiol(2) reacts with fluorescamine to the pyrrolinone derivative 4, and with fluorescein isothiocyanate to 544-(3fi,17~-dihydroxyestran-7a-yl)butylaminothioxomethy1amino]-2-(6-hydroxy-3-oxo-3H-xanthen-9-y1)benzoic acid (5). The conjugate compounds are determined by fluorometry in concentrations below 1 nmol/ml. The binding activity for the cytosol estrogen receptor is analysed by competition against [3H]-estradioì; 50 % displacement of [3H]-estradiol is achieved by 3 at a concentration of 5 x lO-'rnol/l, by 4 at a concentration of 1 x 10-6mol/l and by 5 at a concentration of i,8 x 10-~m0~1. Im Rahmen unserer Arbeiten zur Herstellung markierter Wirkstoff-Denvate werden die in der vorangehenden MiK3) beschnebenen Estradiol-Haptene rnit Fluoreszenzfarbstoffen gekoppelt. Die Kopplungsprodukte sollen in Estrogen-Rezeptor-Studien Anwendung finden. Eine Fluoreszenzmarkierung erlaubt das histochemische Arbeiten an der intakten Zelle durch Fluoreszenzmikroskopie, wobei zwischen Zeilen rnit und solchen ohne Rezeptor unterschieden werden kann und die intrazelluläre Lage der Rezeptoren untersucht werden soli. Aufgrund der Veränderung der Fluoreszenzeigenschaften, wie z. B. Erhöhung oder Senkung der Fluoreszenzintensität oder durch Fluoreszenzpolansation -bedingt durch die Anlagerung der Markersubstanz an den hochmolekularen Rezeptor -sind auch Erkenntnisse über Hormon-Rezeptor-Interaktionen quantitativer Natur zu erwarten. Mit solchen Verfahren könnte die Standard-Untersuchungsmethode ergänzt oder sogar ersetzt werden, was insgesamt zu einem besseren Verständnis der Endokrinologie bestimmter Tumoren hinsichtlich Wachstum und Entwicklung führen könnte. Die Reaktion zwischen Farbstoff und Hapten muB, wenn das Kopplungsprodukt zum Rezeptornachweis in lebenden Zeilen durch Fluoreszenz-Mikroskopie geeignet sein soli, zwei Bedingungen erfiillen: