Lipase from defatted rice bran has been isolated by a new procedure which yields higher enzyme activity and quantity of enzyme. The procedure involves selective ammonium sulphate precipitation followed by ion exchange chromatography using DEAE-Sepharose CL-6B gel and column chromatography. The purified and homogeneous enzyme is also characterized for its various optical, enzymatic, physico-chemical and hydrodynamic properties. The enzyme has an ultraviolet absorption maximum at 276 nm with an extinction coefficient value of 15.25. The fluorescence excitation and cmission maximum values for the enzyme are 285 and 344 nm, respectively. The enzyme has a specific activity of 18 units [peq . mg-' . h-'1 with a pH optimum of 7.5 and a temperature optimum of 30 "C. The enzyme has an average hydrophobicity value of 3980 J/residue and the NPS (frequency of occurrance of non-polar side chains) and P (ratio of polar to non-polar amino acids) values are 0.29 and 1.13, respectively. The enzyme has a sedimentation coefficient value of 2.30 S and the isopotential partial specific volume is 0.697 ml/g. The molecular weight of the enzyme is 30000 and the enzyme is made up of at least two subunits. The enzyme contains 16% alpha-helix, 39% beta-structure and the rest being aperiodic.
Zusammenfassung
Reinigung und Charakterisierung von Lipase aus Reiskleie (Oryza siitiuu L.) Es wird Lipase aus entfetteter Reiskleie nach einer neuen Methode isoliert, nach der das Enzym rnit hoherer Ausbeute und hoherer Aktivitiit erhalten wird. Das Verfahren beinhaltet selektive Ammoniumsulfatfiillung, Ionenaustauschchromatographie mit DEAE-Sepharose CL-6B-Gel und Siiulenchromatographie. Das gereinigte und homogene Enzym wird hinsichtlich seiner optischen, enzymatischen, physikalisch-chemischen und hydrodynamischen Eigenschaften charakterisiert. Das UV-Absorptionsmaximum liegt bei 276 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von 15,25. Die Fluoreszenz-Anregungs-und Emissionsmaxima liegen fur das Enzym bei 285 bzw. 344 nm. Das Enzym hat eine spez. Aktivitiit von 18 Einheiten [pAq mg-' . h-'1 mit einem pH-Optimum von 7 3 und einem Temperatur-Optimum von 30 "C. Das Enzym hat einen mittleren Hydrophobizitiitswert von 3980 J/Rest sowie NPS-(Hiufigkeit des Vorkomens nichtpolarer Seitenketten) und P-Werte (Verhiiltnis von polaren zu nichtpolaren Aminosiiuren) von 0,29 bzw. 1,13. Der Sedimentationskoeffizient und das isopotentiale partielle spezifische Volumen betragen 2,30 S bzw. 0,697 ml/g. Die molare Masse liegt bei 30000 g/mol und das Enzym besteht aus mindestens zwei Untereinheiten. Die Alpha-Helix-und Beta-Strukturanteik betragen 16% bzw. 39%; der Rest ist aperiodisch.