Nutzung von Gen5 und Gen6 ts-Mutanten des Phagen T3 für die Anzeige von Hemmstoffen der DNS-Synthese

✍ Scribed by Dr. D. Scholz; Ch. Meissner; H. A. Rosenthal

• Publisher: John Wiley and Sons
• Year: 2007
• Tongue: English
• Weight: 563 KB
• Volume: 19
• Category: Article
• ISSN: 0233-111X
• DOI: 10.1002/jobm.19790190907

✦ Synopsis

I n an enzyme-specific drug screening system nalidixic acid and 3'-FTdR, inhibitors of DNA synthesis, both reduce the growth of wild type and temperature-sensitive point mutants of phage T3 with different efficiencies. The wild tjype shows the strongest sensitivity against the drugs, while an exonuclease mutant is the most insensitive variant. The DNA polymerase mutant's exhibit an intermediate degree of inhibition.

The anthracycline antibiotics violamycin BI and adriblastin which preferentially inhibit RNA synthesis show the same degree of inhibition for all mutants. This is true also for the RNA synthesis inhibitor lambdamycin, which is identical with chartreusin. The protein synthesis inhibitors chloraniphenicol and o-phenanthroline, a chelating agent, impair all mutants t.0 the same extent.

Our data confirm the hypothesis t h a t structural variants of essential viral enzymes, when compared with the wild type should reveal different sensitivities against specific inhibitors a.nd show that this T3 system could be used for the indication of specific inhibitors of DNA synthesis.

Die Einfiihrung der konditionellen

Letalmutanten durch CAMPBELL (19Gl), EPSTEIN et al. (1963) sowie EDGAR und LIELAUSIS (1964) hat in knapp zwei Jahrzehnten die physiologisch-genetischen Untersuchungen a n haploiden Organismen au Berordentlich befriichtet und zu einer wesentlichen Erweiterung der Genkarten verschiedener Mikroorganisnien und ihrer Viren gef iihrt. Ohne die Verwendung temperaturempfindlicher Mutant en aninialischer Viren waren Erlrenntnisse iiber virale Genfunktionen und ihr Weuhselspiel niit den1 Wirtszellstoffwechsel nicht nioglich gewesen. Eine niehr anwenduiigsorientierte Nutzung temperaturempfindlicher Mutanten wurde von PRESBER et al. (1974) und ROSENTHAL (1975) vorgeschlagen. Die Autoren gingen davon aus, da13 Strukturvarianten eines essentiellen viralen Enzyms (z. B. von ts-Mutanten), verglichen niit dem Wildtypenzym, eine differente Hemmstoffeinpfindlichkeit aufweisen sollten und damit als Indikator einer spezifischen Wechselwirkung zwischen Enzym und Henimstoff dienen konnten. Ein solches Enzym-bzw. Stoffwechselweg-spezifisches Screening sollte sowohl Aussagen iiber die Wirkungsweise des Wirkstoffs erlauben als auch zur weiteren Charakterisierung der teniperaturempfindlichen Lasion beitragen. Strukturvarianten essentieller Virusenzynie sind sicher geeignete Modelle, urn auf Grund ihrer variierten Enzym-Substrat(1nhibitor)-Beziehung Enzyniinechanismen zu studieren. So fanden SCHROEDER u. JANTSCHAK (1978) bei in witro-Untersuchungen an drei Strukturvarianten der T4-DNS-Polymerase, da13 o-Phenanthrolin das Antimutatorenzyni an1 starksten hemmte, woraus die Autoren auf eine gestorte Zink-Bindungskapazitat bei dieser Enzymvariante schlossen. JANTSCHAK u. SCHROEDER (1978) haben fur das Substratanalogon Pyridoxalphosphat eine um einen Faktor 3 kleinere Inhibitorkonstante beiin Antiniutatorenzym verglichen mit der Wildtyp DNS-Polymerase gefunden.