Die Biosynthese der Stärke. 3. Mitteilung: Die Herstellung von Kartoffelphosphorylase großer Reinheit mittels DEAE -Cellulose- Säulenchromatographie
✍ Scribed by Prof. Dr. -Ing. J. Holló; Dr. -Ing. E. László; A. Hoschke
- Publisher
- John Wiley and Sons
- Year
- 1964
- Tongue
- English
- Weight
- 469 KB
- Volume
- 16
- Category
- Article
- ISSN
- 0038-9056
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✦ Synopsis
Die Biosynthese der Starke 3. Mitteilung*) : Die Herstellung von Kartoffelphosphorylase grol3er Reinheit inittels DEAE -Cellulose-Saulenchroinatographie * *) .'on J. H O L L ~, E. lA.kmi) untl A. HOS(*HKE, Budapest (Ungarn) %urn Stndium tier Riosynthese der Starke sowie tlcr Frage, welche Kolle dic Phosphorylase in vivo spielt,, ist unt'er anderem die Kestimmuug des Wirkungsinechanismus cles pf lanzlichen Enzyms, seiner Eigenschnft'eii und St,rukt'ur und die Herstellung von reiner, von andercn EnzymeiweiRst.offen freier Phosphorylase notjwentlig. In den bisher verijffent,lichtjen hlet,hoden zur Herst'ellung von Phosphorylase (1, 2, 3, 4, 5, 6. 7 , 8. 9) sind nur in dem Vcrfahren von LEE (9) a'uf (lie Rcinheit, des fiir (la's Enzym charakteristischcri EiweilScs bezogciic spezifische Akt,ivit&tswert,e zu finden. Die hlethodc enthalt den grundlegenden Fehlcr; (la13 da.s hergcstellte Enzym Spuren von Amylase enthalt'. Demzufolge ist' nur die Herstellung von synt)het,ischer Amylose mit cincm Polymerisatjionsgracl von hochstens 200 moglieh (10). Die Aniylaseakt'ivit.8t solcher Enzymprapsratc innkt,iviert, man ruitkels Hg-11-Chlorid, Ammoniummolybdat~ (lo), otlcr durch Warmebehandlung (11).
Zu~crlassige Daten iiber die Wirkung der Phosphoryhsc, den Mechanismus tler Synt'hese und tlir Eigenschaft,en der synt~lietisiert~en Amylose kann insii iiur niit Phospliorylaseprlparat,en gewinnen, die frci yon verurirririi#eiidem EiweifJ sind. Nachfolgcntf bericht,en wir uber unsere Vcrsuche zur Herst>ellung von amgla,sefreicr Kartotfelphosphor!.lasc groBer spczifischer Akt.ivit,at..
Materialieu u t i . d Methoden
Zur Gewinnung der Phosphorylase haben wir im Handel erhiilt~lichc, vollkommen cntwickelte Kartnffelri vcrwentlet, clenn wir haben festgestellt', daB junge Kartotfelknollen hicrfiir weniger gut, geeignet' sind. Zuni Auspressen tles Kartoffelsaftes u n d zur Vorfrakt'ionierung mittels Ammoniumsulfat wurden 0,50/,-ige Natriumdithionit,losung p. a., Ammoninmsulfat, und 0,5-molare Citratpufferlosung (pH = 7 ) verwendet . Zur DEAE-Cellulose-Saulenchromatographie *) Die 2. Mitteilung rrscheint in Periodira Polytechnica 1964 ( i n 1 Driiclr). **) 50. Veroffentlichnng des Institutes fur Landwirtsrhaft-lic~li-Chernische Technologie der Technlschen Universital Riidapert ubrr die Erforschung von Polysnccharidcn.